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柱溫對液相色譜柱的影響

更新時(shí)間:2023-02-07點(diǎn)擊次數(shù):3584

許多因素都會影響峰形和保留時(shí)間,例如色譜柱尺寸、流動相添加劑和分析物特性。在液相色譜方法開發(fā)中,柱溫是一個(gè)重要且經(jīng)常被忽視的因素。這是因?yàn)橹鶞貢绊懛逍巍⒈A艉捅硥骸jP(guān)于保留時(shí)間,隨著柱溫的升高,保留時(shí)間會減少。這是因?yàn)?,色譜柱的溫度越高,分析物在色譜柱的固定相和流動相之間交換得越快。隨著這個(gè)過程變得越來越快,分析物的保留時(shí)間不會變長,從而導(dǎo)致保留時(shí)間更短,峰形通常更有效。但是,請記住,升高溫度對所有分析物的影響并不相同,這意味著保留因子對每種分析物的影響可能不同。例如,在下面的圖 1 和圖 2 中,使用了相同的方法和相同的色譜柱,但這些方法使用兩種不同的色譜柱溫度運(yùn)行,30和 55。在本例中,所有分析物的保留時(shí)間均較短,差異高達(dá) 0.19 分鐘。

圖 1:30℃下 Force Biphenyl 50 x 3mm, 3 µm 上的脂肪酸乙酯

圖 2:55℃下 Force Biphenyl 50 x 3mm, 3 µm 上的脂肪酸乙酯。


但是,如果您在分離峰時(shí)遇到困難,或者想要在峰間獲得更好的分離度,嘗試降低柱溫可能會有所幫助。正如增加柱溫會導(dǎo)致保留時(shí)間縮短,因?yàn)橹系南嗷プ饔盟俣仍黾樱档蜏囟葧鸬较喾吹淖饔?,這反過來有助于分析物的分離。還有一些分析物在較低的柱溫下表現(xiàn)出更好的分離效果。例如,CBDA、CBGA、CBC 和 THCA 等一些大·麻素在較低溫度下表現(xiàn)出z佳分辨率。在下面的示例中,化合物的第1個(gè)色譜圖是在 40的柱溫下分析的C,CBDA 和 CBGA 或 CBC 和 THCA 之間沒有基線分辨率,但是,當(dāng)柱溫為 30 時(shí),化合物的分離度更好。這可以在下面的圖 3 和圖 4 中看到。

圖 3:大·麻素在 40℃柱溫下的色譜圖。

在 40℃柱溫下的色譜圖


圖 4:大·麻素在 30℃柱溫下的色譜圖。

在 30℃柱溫下的色譜圖


雖然上述情況在大多數(shù)情況下都是正確的,但在某些情況下,較高的溫度對于較短的保留時(shí)間和分析物分辨率來說效果更好。麥角生物堿差向異構(gòu)體和 PFAS 化合物在較高的柱溫下顯示出z佳結(jié)果。在下面的示例中(圖 5),使用 Raptor Biphenyl 100 x 2.1mm,2.7µm 色譜柱在 50和 60下分析了麥角津和麥角津。在 50時(shí),兩種分析物沒有分離,但在更高的柱溫,60,兩種分析物開始分離。

圖 5:柱溫對麥角生物堿差向異構(gòu)體的影響。


柱溫也會影響柱的背壓。由于高流動相粘度會導(dǎo)致高背壓,因此提高色譜柱溫度有助于降低流動相粘度,從而降低背壓。例如,在上面的圖 1 和圖 2 中,兩者的起始條件、流動相和梯度條件都相同。但是,兩者的柱溫不同。當(dāng)柱溫設(shè)置為 30時(shí),壓力為 2100 psi。當(dāng)柱溫設(shè)置為 55時(shí),壓力為 1500 psi,產(chǎn)生的 psi 差值約為 600 psi。

雖然較高的柱溫有助于改善峰形和縮短保留時(shí)間,但重要的是不要超過柱的推薦溫度。在色譜柱上使用過高的溫度會導(dǎo)致色譜柱壽命大大縮短。您通常可以在制造商的色譜柱使用指南中找到色譜柱的z高溫度。

因此,請記住,盡管柱溫經(jīng)常被忽視,但它是您在設(shè)置方法時(shí)需要優(yōu)化的一個(gè)重要參數(shù)。為您的方法中的分析物找到合適的柱溫可能需要反復(fù)試驗(yàn),但在早期方法開發(fā)中考慮這個(gè)參數(shù)可以帶來更好的分辨率和更有效的方法。



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